CRISPR/Cas9基因编辑系统设计（包含Base editor）专题研讨会（6.25-26 网络研讨会）

1、Cas细胞的并不必需

1.1、Cas细胞的分类

1.2、三种运使用最相当多的Cas细胞

1.3、Cas9细胞的本体特点简介

1.4、Cas9细胞与PAM序列

1.5、Cas9的密码子可用性与NLS

1.6、如何并不必需Cas细胞？

2、Cas细胞资源查询

3、以上段落涉及试验中的指引、试验中熟练、试验中结果参考

第一天傍晚13:30-17:00

四、CRISPR（gRNA）的新设计与合成

1、新设计gRNA之前必需确定的事（校对简而言之的并不必需、细胞质本体归纳及查询方确切方法有）

2、RNA的新设计（在线互动性新设计演练）

3、gRNA暗示表征的框架

3.1、gRNA的体外暗示（RNP）

3.2、gRNA细胞膜暗示表征框架

3.3、常见于gRNA/Cas细胞暗示表征

4、以上段落涉及试验中的指引、试验中熟练、试验中结果参考

五、gRNA活性样品

1、 Indel甲基化样品的基本上简而言之

1.1、错配内切酶确切方法（EMC）

1.2、TIDE/ICE定量

1.3、TA沃克确切方法

1.4、酶烟熏段长度多态性确切方法（RFLP）

1.5、其他方确切方法有

2、基于生殖的活性可验证方确切方法有

3、以上段落涉及试验中的指引、试验中熟练、试验中protocol、试验中结果参考

六、细胞质校对用以Cas12a(Cpf1)

1、Cpf1的发现

2、Cpf1与Cas9的区别

3、Cpf1的运使用事例

4、Cpf1可同时选择性多个细胞质的校对

第二天上午8:30-11:30

七、借助于CRISPR/Cas9应用创建细胞质四组校对细胞膜系

1、要能细胞质的细胞质四组四均是由归纳

1.1 要能细胞质在借此细胞膜里面的暗示状况

1.2 如何确定细胞质的重要的功能域

1.3 径向剪接及多基因暗示本

2、细胞质四组校对简而言之新设计

2.1细胞质敲除

2.2细胞质敲入

2.3定点甲基化

2.4大片段移除

3、sgRNA的新设计与活性可验证

3.1 如何并不必需右边合适的gRNA？

4、使用细胞质敲入的酪氨酸DNA的新设计

4.1 Donor DNA的暗示方式

4.2 使用ssODN作为Donor

4.3 新设计ssODN的应将

4.4 填入位点与DSB位点一致的状况

4.5 填入位点与DSB位点不一致的状况

5、核糖体（和/或酪氨酸）导入细胞膜系的方确切方法有（脂质体转染，电转，病毒转导）

6、阳性沃克比对

6.1 抗生素比对（Protocol）

6.2 挑单细胞膜沃克（Protocol）

6.3 细胞质型鉴别

6.4根据碰巧稳定性估算必需比对的沃克数量

6.5 有限溶解确切方法溶解细胞膜的流程（Protocol）

6.6 细胞质型鉴别

7、细胞质四组校对细胞膜系的建立联系

8、降低细胞质敲入（同源重四组）稳定性的简而言之

9、以上段落涉及试验中的指引、试验中熟练、试验中protocol、试验中结果参考

八、CRISPR/Cas子系统选择性的细胞质校对事例参考

1、CRISPR同样工作流程

2、Knock-out事例1

3、Knock-out事例2

4、Knock-in事例

第二天傍晚13:30-17:00

九、借助于CRISPR应用创建细胞质四组校对鸟类

1、CRISPR/Cas方确切方法有与传统意义方确切方法有的比较

2、细胞质校对鸟类合成流程

3、通过电子显微镜注射确切方法合成细胞质校对豚鼠

3.1、豚鼠的超排和电子显微镜注射

3.2、生殖移植和细胞质型鉴别

3.3、电子显微镜注射确切方法授予的细胞质校对鸟类的鉴别

4、通过染色质沃克确切方法合成细胞质校对鸟类

4.1、酪氨酸细胞膜分离、培养

4.2、酪氨酸细胞膜的细胞质校对

4.3、染色质核移植可用

4.4、生殖移植

4.5、细胞质校对个体的鉴别和扩繁

十、CRISPR基因暗示选择性/基因暗示选择性以及CRISPRscreen

1、dCas9的特征简介

2、运用CRISPR应用透过基因暗示诱导的归纳

3、CRISPR基因暗示选择性/基因暗示选择性应用及可用性

4、CRISPRoff

5、CRISPR screen及CRISPRa/iscreen（高通量比对）

十一、单DNA校对与单DNA校对器（CBE、ABE、PE）

1、 单DNA校对器的归纳

2、 单DNA校对器的可用性

3、 先导校对应用归纳及其运使用

十二、细胞质校对应用的脱靶疑虑

1、 脱靶造成的主因

2、 细胞质校对用以的脱靶后果

3、 脱靶样品方确切方法有

4、 如何降低脱靶？

十三、Cas12和Cas13细胞及其运使用

1、 Cas12和Cas13与Cas9的差异

2、 Cas13特点及其在核酸样品里面的运使用

3、 SHERLOCK及DETECTR子系统归纳

十四、细胞质校对应用涉及资源

参考CRISPR/Cas子系统以及细胞质校对涉及的核糖体、gRNA、月刊、细胞膜、Protocol以及应用blog等资源。

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2022/6/25-26 使用腾讯可能全体会议客户端透过在线可能全体会议（非录播)

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